Диагностика бруцеллеза сельскохозяйственных животных

Максим Косарев
08.02.2021
Республика Татарстан
274

Возникновение и развитие бруцеллезного процесса, формирование его патогенетических фаз сопровождается иммунологической перестройкой организма. Феномены иммунологической перестройки при бруцеллезе послужили основанием для создания различных методов диагностики. Значение своевременной диагностики и сложность ее при бруцеллезе уже давно осознаны.

Наименее достоверным является клинический метод диагностики, т.к. клинические признаки болезни дают основание лишь подозревать у животных наличие бруцеллеза, ибо аналогичные симптомы заболевания могут появляться и при ряде других причин инфекционного и неинфекционного характера.

Наиболее точным методом диагностики является бактериологический- выделение культуры бруцелл от больного животного или из абортированного плода. Однако и в этом случае о точности можно говорить лишь при нахождении возбудителя; отрицательный же результат исследования еще не является убедительным доказательством отсутствии бруцеллеза. Кроме того, этим методом трудно провести массовую проверку скота.

Порядок исследования патологического материала:

1.Учет эпизоотологических данных (что не всегда удается).

2.Вскрытие плода для бактериологического исследования.

3.Посевы на питательные среды с последующим выделением чистой культуры. Часть посевов выращивают в атмосфере углекислого газа.

4.Микроскопия мазков, окрашенных по Грамму или Козловскому.

5.Биопроба. Заражение лабораторных животных, чаще морских свинок.

6.Микроскопия мазков из выделенных культур.

7.РА на стекле с выделенными культурами.

Работами многих исследователей подтверждена высокая специфичность и чувствительность аллергического метода диагностики бруцеллезной инфекции. Но есть недостаток. Аллергическая реакция появляется в более поздние периоды развития инфекции, а в борьбе с бруцеллезом имеет большое значение ранняя диагностика заболевания. Чем раньше будут выделены больные животные и, следовательно, чем раньше будут приняты соответствующие меры борьбы, тем большая гарантия быстро ликвидировать очаг инфекции.

Этому требованию более удовлетворительно отвечают серологические способы исследования в сравнении с методами бактериологической и аллергической диагностики.

Из серологических способов диагностики бруцеллеза наиболее широко применяется реакция агглютинации,предложенная в 1897 г. Райтом и Семплом. Под названием реакции Райта она вошла в широкую практику вследствие простоты постановки, легкости учета и большой диагностической ценности.

РА основана на специфическом взаимодействии сыворотки больного бруцеллезом животного с бруцеллезным антигеном. Эта реакция зависит от наличия в сыворотках крови специфических антител.

Сущность РА заключается в том, что при добавлении к исследуемой сыворотке антигена (взвеси гомологичных микробов) постепенно происходит скучивание микробов с образованием комочков, оседающих на дно пробирки в виде зонтика. Процесс агглютинации протекает в 2 фазы: в первой фазе микробы соединяются с агглютининами (специфическая фаза). Во 2-й фазе происходит скучивание микробов и выпадение их в осадок под влиянием электролитов, нарушающих равновесие этой взвеси (неспецифическая фаза). Этот осадок называется агглютинатом.

Пластинчатая реакция агглютинации с роз-бенгал антигеном (РБП).Антиген для РБП представляет собой суспензию бруцелл, окрашенных бенгальским розовым в розовый цвет. При соединении бруцелл с антителами образуются комочки красного цвета. Ставится реакция на эмалированных белых пластинках с луночками.

Кольцевая проба с молоком. В молоке также имеются агглютинины. К 2 мл. молока добавляют 1-2 капли антигена, окрашенного гемотоксилином в синий цвет. При наличии в молоке бруцеллезных антител окрашенный антиген соединяется с ними и с капельками жира. На поверхности молока образуется кольцо синего цвета, а толща молока белая. При отрицательной реакции молоко остается равномерно окрашенным.

Для диагностики бруцеллеза в практике широко применяется также реакция связывания комплемента (РСК).

Сущность РСК состоит в том, что при соединении антигена со специфическим антителом образуется комплексное вещество (антитело + антиген), обладающее способностью адсорбировать (связывать) на своей поверхности комплемент. РСК протекает в 2 фазы. Вначале соединяют испытуемую сыворотку с антигеном и вводят в эту систему оттитрованное количество комплемента (бактериолитическая система). Если взяты специфические компоненты, например, бруцеллезная сыворотка и бруцеллезный антиген, то произойдет их соединение и адсорбция комплемента. Следовательно, в системе не останется свободного комплемента, т.к. он целиком будет адсорбирован комплексом антиген + антитело. Если в сыворотке крови не имелось специфических антител, комплемент остается в системе в свободном состоянии. Это первая фаза реакции.

Чтобы узнать произошла ли адсорбция комплемента в первой фазе или он остался свободным, вводят в реакцию вторую, так называемую гемолитическую систему, всегда специфическую, состоящую из эритроцитов барана (антиген) и специфической гемолитической сыворотки (антитело). Это вторая фаза.

Гемолитическая сыворотка обладает способностью разрушать, лизировать эритроциты барана в присутствии свободного комплемента. Поэтому вторая фаза является индикатором процессов, происходящих в первой фазе реакции.

Если в первой фазе реакции были соединены неспецифические компоненты и не наступило адсорбции комплемента, то свободный комплемент присоединится к гемолитической системе, произойдет лизис эритроцитов. Это будет указывать на отрицательный результат реакции в первой фазе.

Наоборот, если в первой фазе будут взяты специфические компоненты, то произойдет их соединение и одновременно адсорбция комплемента. Тогда, в силу отсутствия свободного комплемента во второй фазе реакции, лизис эритроцитов не наступит. Реакция положительная.

С 2006 г. для диагностики бруцеллеза утверждена реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). Сущность. На эритроциты адсорбируется бруцеллезный антиген и этот эритроцитарный диагностикум добавляется к разведениям сыворотки. Если в сыворотке крови есть бруцеллезные антитела, то происходит агглютинация, выпадает осадок в виде зонтика. Если реакция отрицательная, то эритроциты осядут на дно в виде пуговки.

С 80-х годов 20-го столетия в стране появилось много работ, посвященных, разработке иммуноферментного анализа (ИФА) для диагностики бруцеллеза. Принцип метода. Как и все иммунологические методы ИФА базируется на реакции взаимодействия антитела с антигеном. ИФА основан на выявлении комплекса антиген-антитело, образуемого адсорбированным на поверхности лунок полистироловых планшетов для иммунологических реакций антигеном с находящимся в испытуемом материале (сыворотках) специфическими антителами. Образованный комплекс вступает в реакцию с меченым пероксидазой иммуноглобулином антивидовой гипериммунной сыворотки.

Образовавшийся специфический комплекс выявляют посредствам добавления субстратной смеси, включающей в себя субстрат пероксидазы – перекись водорода и вещество, которое окисляясь, дает окрашенный продукт. Величина оптической плотности продукта ферментативной реакции пропорциональна содержанию антител в испытуемом материале.

Регистрацию и учет реакции проводят визуально или спектрофотометрически.

В 2003 году в ветеринарную практику был принят метод молекулярно-генетической диагностики бруцеллеза – полимеразная цепная реакция (ПЦР). ПЦР предназначена для выявления ДНК бактерий рода Brucella (B. melitensis, B. abortus, B. suis, B. ovis, B. canis) в биологическом материале от животных, не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, в случае аборта или проявления у них других признаков (бурситы, гигромы, орхиты, эпидидимиты), вызывающих подозрение на бруцеллез и (или) при получении положительных и сомнительных результатов серологического исследования.

ПЦР-анализ состоит из 3-х этапов: 1. Выделение ДНК из исследуемого материала. 2. Собственно ПЦР – амплификация специфического участка ДНК бруцелл. 3. Электрофоретический анализ продуктов ПЦР и учет результатов ПЦР-анализа.

Диагностика бруцеллеза осложняется еще тем, что от животных, отрицательно реагирующих со стандартными антигенами из типичных S-форм бруцелл, выделяются атипичные диссоциированные штаммы в R-форме. В этих случаях для успешной ликвидации бруцеллеза необходимо применять такой антиген, который разработан, апробирован и внедрен бруцеллезный R-антиген ВНИВИ, который улавливает только R-антитела. Применяется для дифференциальной диагностики бруцеллеза в стадах, где животных прививают вакциной из штамма 82.

Республика Татарстан
Опубликовано: 08 февраля, 2021 в 14:34
Тэги: Животноводствобруцеллёздиагностика бруцеллёза

Нет комментариев

Похожие посты